1. 需检查的供试品如在分装后 24 小时以内进行支原体检查者可贮存于 2~8℃;超过24 小时应置-20℃以下贮存。
2. 检查支原体采用支原体肉汤培养基和支原体半流体培养基。半流体培养基在使用前应煮沸10~15 分钟,冷却至 56℃左右,然后加入灭能小牛血清(培养基:血清比例为 8:2;也可使用经验证过的其它血清),并可根据需求加入适量青霉素,充分摇匀。肉汤培养基除无需煮沸外,使用前需同样补加上述成分。
3. 取每支装量 10 ml(含 2ml 血清)的支原体肉汤培养基各 4 支、相应的支原体半流体培养基各 2 支(已冷至 36℃±1℃),每支培养基接种供试品 0.5~1.0 ml,置 36℃±1℃培养 21天。于接种后的第 7 天从 4 支支原体肉汤培养基中各取 2 支进行次代培养,每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体肉汤培养基各 2 支,置 36℃±1℃培养 21 天,每隔 3 天观察 1 次。
4. 结果观察:培养结束后,如接种供试品的培养基均无支原体生长,则供试品判为合格;如疑有支原体生长,可取加倍量供试品复试,如无支原体生长,供试品判为合格,如仍有支原体生长,则供试品判为不合格。